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耗材專區(qū) | 應(yīng)用S-X3不銹鋼凝膠凈化柱檢測(cè)水產(chǎn)品中的雌激素

更新時(shí)間:2024-12-20       點(diǎn)擊次數(shù):1117

前言


雌性激素(Estrogen),又稱女性激素,是一類主要的女性荷爾蒙。分為兩大類(均為類固醇激素),即雌激素和孕激素。雌性激素是雌性脊椎動(dòng)物的性激素,具有促進(jìn)第二性征出現(xiàn)的作用。過(guò)高的雌性激素會(huì)對(duì)男性的生殖系統(tǒng)產(chǎn)生明顯影響,包括影響雄性激素的水平,導(dǎo)致內(nèi)分泌紊亂,同樣過(guò)高的雌激素會(huì)增大女性生病的概率,也會(huì)對(duì)青春期的孩子發(fā)育造成影響,故找到一種快捷高效的檢測(cè)方法尤為重要。

本實(shí)驗(yàn)參考《GB 31660.2-2019 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 水產(chǎn)品中辛基酚、壬基酚、雙酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇?xì)埩袅康臏y(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法》,利用GPC1000全自動(dòng)凝膠凈化系統(tǒng)對(duì)樣品提取液進(jìn)行凈化,GC-MS進(jìn)行檢測(cè),方法簡(jiǎn)單、快捷,能夠很好地去除干擾物對(duì)目標(biāo)物的影響。



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實(shí)驗(yàn)過(guò)程



1.1 儀器與試劑
GPC1000全自動(dòng)凝膠凈化系統(tǒng)(北京萊伯泰科儀器股份有限公司);
MVP 全自動(dòng)高通量真空平行濃縮儀,北京萊伯泰科儀器股份有限公司;
氣質(zhì)聯(lián)用儀:7890B-5977B,安捷倫科技(中國(guó))有限公司;
S-X3不銹鋼凝膠凈化柱(20*300mm,貨號(hào):Y020207015,北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司;
E.T.氮吹濃縮儀,貨號(hào):C020017,北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司;
冷凍離心機(jī),GL-20G-Ⅱ,上海安亭科學(xué)儀器廠;
甲醇、環(huán)己烷、乙酸乙酯(色譜純),購(gòu)自賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司;
碳酸鈉(分析純),購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 工作液配制
混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液適量于10mL容量瓶中,甲醇定容,配成濃度為雙酚A50μg/L,已烯雌酚100μg/L,雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇200μg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。
取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液50μL、100μL、200μL、500μL、1000μL于1.5mL樣品瓶中,40℃氮吹至干,按1.3.3方法衍生,制成雙酚A濃度均為2.5μg/L、5μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L的梯度系列,已烯雌酚濃度均為5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L的梯度系列,雌酮17a-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇濃度均為10μg/L、20μg/L、40μg/L、100μg/L、200μg/L的梯度系列標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分
1.3.1 樣品制備
將水產(chǎn)品樣品均質(zhì),稱取5.0g樣品,加入3mL100g/L的碳酸鈉溶液,加入20mL乙酸乙酯,超聲15min,5000r/min離心4min,取上清液,加入10mL乙酸乙酯復(fù)提,合并上清液后,40℃旋蒸至近干,加入8mL50%環(huán)己烷乙酸乙酯溶液復(fù)溶,混勻,待凝膠凈化處理;同時(shí)做樣品空白。
1.3.2 凝膠凈化處理
按照下圖所示的方法進(jìn)行GPC1000方法編輯,并加載方法到相應(yīng)通道,進(jìn)行樣品的凝膠凈化。收集洗脫液,40℃氮?dú)獯蹈?,待衍生?/section>
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1.3.1 衍生化
在1.3.2中的濃縮瓶中加入200μL丙酮,加入30μL七氟丁酸酐,用錫箔紙封口,在35℃水浴中衍生1h,用正己烷定容至1.0mL待測(cè)。
1.3.1 GC-MS檢測(cè)條件
色譜柱:HP-5MS 30m*0.25mm* 0.25μm;
進(jìn)樣口溫度:250℃,流速:1mL/min;
不分流進(jìn)樣,1min后分流60mL/min;
進(jìn)樣量:1μL;
柱箱:120℃,保持2min,以15℃/min升至250℃,以5℃/min升至 300℃,保持5min;
溶劑延遲:8.5min;
離子源溫度:230℃;
四極桿溫度:150℃;
傳輸線溫度:280℃。


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實(shí)驗(yàn)結(jié)果



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表1 水產(chǎn)品中雌激素的回收率

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圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

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圖2 空白樣品色譜圖

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圖3 加標(biāo)樣品色譜圖

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實(shí)驗(yàn)結(jié)論



本次實(shí)驗(yàn)展示了一種使用S-X3不銹鋼凝膠凈化柱(20*300mm,貨號(hào):Y020207015,對(duì)水產(chǎn)品中的雌激素測(cè)定的凈化,回收率在70.5%~110.5%之間,重現(xiàn)性RSD為3.9-8.1%,回收率高、重現(xiàn)性良好,說(shuō)明S-X3不銹鋼凝膠凈化柱,適用于水產(chǎn)品中的雌激素測(cè)定的凈化,并且結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

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參考文獻(xiàn)



[1] GB 31660.2-2019 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 水產(chǎn)品中辛基酚、壬基酚、雙酚A、已烯雌酚、雌酮、17α-乙炔雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇?xì)埩袅康臏y(cè)定 氣相色譜-質(zhì)譜法。



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